Decoy ODN靶向抑制人谷胱甘肽S-转移酶P1基因表达对肺癌细胞铂类耐药的影响

【摘要】肺癌发病率在所有肿瘤中居前列，其发病率居高不下且有逐年上升的趋势。进展期肺癌患者大多只能依靠化疗取得较好的预后效果，但肺癌化疗效果的个体差异很大。因此，寻找一种能够指导肿瘤病人化疗方案制定的分子标志物，对于肿瘤病人的个体化治疗具有重要价值。有文献报道，GSTP1可能与癌细胞对化疗药的耐受性相关，是癌细胞抗药性的标志之一，可作为临床上预测GSTP1在肿瘤组织或器官中表达与化疗耐药性相关的指标。基于此，本实验以GSTP1基因作为铂类耐药研究的靶点，运用decoyODN技术靶向抑制GSTP1基因表达，研究其对人肺癌细胞在化疗药物卡铂（Carboplatin，CBP）的影响下增殖和凋亡情况的改变。方法：MTT法测定卡铂作用下A549细胞的生长抑制率及IC50；设计并合成三条寡核苷酸序列：①针对GSTP1基因上的转录因子结合位点（transcriptionfactorbindingsite，TFBS）合成的ApSpBS；②针对GSTP1基因上的RNA聚合酶结合位点（TATAbox）合成的RNApolBS；③在ApSpBS基础上乱序合成的ScrambledODN序列；转染并摸索最适转染浓度；Westernblot测定转染后不同组GSTP1蛋白表达差异；免疫细胞荧光染色观察转染并加药后不同组GSTP1表达的差异；MTT检测转染并加药后不同组之间A549细胞生长抑制率的差异；流式细胞术测定转染并加药后不同组之间细胞凋亡及坏死率的差异。结果：MTT法测定卡铂作用下A549细胞的IC50为91μg/mL。转染最适浓度为100nM；Westernblot测定转染后ApSpBS组、RNApolBS组与ScrambledODN组相比GSTP1表达明显降低（p<0.01）；ApSpBS组、RNApolBS组与对照组相比GSTP1表达明显降低（p<0.01）；而ScrambledODN与对照组相比无显著差异（p>0.05）。免疫细胞荧光染色结果显示ApSpBS组、RNApolBS组GSTP1阳性表达明显弱于ScrambledODN和对照组。MTT结果显示ApSpBS-CBP组、RNApolBS-CBP组A549生长抑制率明显高于ScrambledODN-CBP和CBP组，有极显著性差异（p<0.01），ApSpBS-CBP组生长抑制率明显高于RNApolBS-CBP组，有显著性差异（p<0.05）。流式细胞术结果显示ApSpBS-CBP组、RNApolBS-CBP组A549细胞坏死和凋亡率总和明显高于ScrambledODN-CBP和CBP组，有极显著性差异（p<0.01），ApSpBS-CBP组坏死和凋亡率总和明显高于RNApolBS-CBP组，有显著性差异（p<0.05）。结论：转染ApSpBS、RNApolBS后，A549细胞中GSTP1表达水平明显下降，靶向GSTP1基因的TFBS和RNA聚合酶结合位点的寡核苷酸序列均有效地抑制了GSTP1基因的表达，增强了A549细胞对卡铂的化疗敏感性。
【作者】于升；
【导师】赵慧；
【作者基本信息】吉林大学，人体解剖与组织胚胎学，2014，硕士
【关键词】DecoyODN；卡铂；GSTP1；化疗耐药；

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